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作者 DolphinWendy 在 PTT 全部看板的留言(推文), 共15則

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[ Biotech ]37 留言, 推噓總分: +10

作者: DolphinWendy - 發表於 2012/10/06 22:12(13年前)

11^F→DolphinWendy:因為實驗室學姊們都說回收率低，甚至都要下到10~20ul10/07 10:35

12^F→DolphinWendy:學姊們幾乎回收率都很低，所以vector幾乎要下到10~2010/07 10:36

13^F→DolphinWendy:至於比例呢，是用[vector]x7.6x量:[linker]x0.1x量10/07 10:38

14^F→DolphinWendy:照這樣算linker要加超多吧@@10/07 10:40

15^F→DolphinWendy:vector當然可以多切一點....只是我想找出原因...不然10/07 10:41

16^F→DolphinWendy:會越下越多...我之前有在不同實驗室做過cloning，10/07 10:41

17^F→DolphinWendy:vector頂多下個3~5ug就夠了，因為回收率夠高10/07 10:42

18^F→DolphinWendy:不過之前不是自己設計的linker，而是另外一個切下來10/07 10:43

19^F→DolphinWendy:的insert，在這實驗室所設計的linker是很多切位合起10/07 10:44

20^F→DolphinWendy:來的，以利後續的步驟。10/07 10:44

21^F→DolphinWendy:是ligation做n次，根本沒辦法挑菌，因為根本沒長= =10/07 10:45

22^F→DolphinWendy:老闆也叫我直接沉澱直接ligation，但是我覺得不可能.10/07 10:49

23^F→DolphinWendy:因為我digest完不要的那一段有2kb多，可是我要接進去10/07 10:50

24^F→DolphinWendy:的linker只有45bp，這樣直接沉澱ligate太危險了10/07 10:51

30^F→DolphinWendy:ㄜ...為什麼之前的實驗室試教我用乘的呢@@10/08 00:37

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