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[求救]關於Cloning construct的困難...
[ Biotech ]37 留言, 推噓總分: +10
作者: DolphinWendy - 發表於 2012/10/06 22:12(13年前)
DolphinWendy 在 PTT 最新的留言, 共 15 則
[求救]關於Cloning construct的困難...
[ Biotech ]37 留言, 推噓總分: +10
作者: DolphinWendy - 發表於 2012/10/06 22:12(13年前)
11FDolphinWendy:因為實驗室學姊們都說回收率低,甚至都要下到10~20ul10/07 10:35
12FDolphinWendy:學姊們幾乎回收率都很低,所以vector幾乎要下到10~2010/07 10:36
13FDolphinWendy:至於比例呢,是用[vector]x7.6x量:[linker]x0.1x量10/07 10:38
14FDolphinWendy:照這樣算linker要加超多吧@@10/07 10:40
15FDolphinWendy:vector當然可以多切一點....只是我想找出原因...不然10/07 10:41
16FDolphinWendy:會越下越多...我之前有在不同實驗室做過cloning,10/07 10:41
17FDolphinWendy:vector頂多下個3~5ug就夠了,因為回收率夠高10/07 10:42
18FDolphinWendy:不過之前不是自己設計的linker,而是另外一個切下來10/07 10:43
19FDolphinWendy:的insert,在這實驗室所設計的linker是很多切位合起10/07 10:44
20FDolphinWendy:來的,以利後續的步驟。10/07 10:44
21FDolphinWendy:是ligation做n次,根本沒辦法挑菌,因為根本沒長= =10/07 10:45
22FDolphinWendy:老闆也叫我直接沉澱直接ligation,但是我覺得不可能.10/07 10:49
23FDolphinWendy:因為我digest完不要的那一段有2kb多,可是我要接進去10/07 10:50
24FDolphinWendy:的linker只有45bp,這樣直接沉澱ligate太危險了10/07 10:51
30FDolphinWendy:ㄜ...為什麼之前的實驗室試教我用乘的呢@@10/08 00:37
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暱稱:小海豚
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