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討論串[問題]如果蛋白表現量不夠

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Re: [問題]如果蛋白表現量不夠

推噓3(3推 )留言3則，0人參與作者Loron.時間18年前 (2008/02/27 11:57)資訊

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※ 引述《dieman31.bbs@ptt.cc ( )》之銘言：. My wild guess is the incompatibility of protein assay with the detergent. in your lysis buffer.... --. ╭──── Origin

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Re: [問題]如果蛋白表現量不夠

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者Ren (wisc)時間18年前 (2008/02/27 11:09)資訊

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既然plasmid都有了，要不要換幾個host試試？. Like BL21(DE3)pLysS/pLysE to get more control over the strong promoter.. 尤其是Doubling time變大的時候。（這一點可能要問你自己的經驗了。）. 其他的，就問實驗

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Re: [問題]如果蛋白表現量不夠

推噓1(1推 )留言1則，0人參與作者dieman31 ( )時間18年前 (2008/02/26 15:20)資訊

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痾我最近遇到一個超奇特的問題. 就是我以前養細胞破蛋白來跑western. 大部分蛋白濃度都是在2~8 micro gram / micro leter. 可是我上次抽出來的那個蛋白我測濃度的時候竟然高到嚇人. 我幾乎稀釋一千倍已經10次了 (意思是我總共稀釋了10的30次方倍). 我取 1

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Re: [問題]如果蛋白表現量不夠

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者simonmiho (Bear)時間18年前 (2008/02/26 14:23)資訊

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沒記錯的話21a是 T7 promotor....應該是要先確定在該. host有無表現吧...... 有 Ab 的話就要先試..再去看是不是. 用His or GST 主要是便利purify and soluble...... 我覺得先改善induction 的condition為主... --.

[問題]如果蛋白表現量不夠

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者McRay (西施就是愛的天使)時間18年前 (2008/02/26 10:02)資訊

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如題~. 使用pET21a + BL21(DE3)系統 NdeI and HindIII這組酵素. Without any fusion tag. 實驗室有兩個學弟表現他們的蛋白量都蠻大的. 但是我這個蛋白在這系統表現量很低，連inclusion body都沒有. 定序的結果確定是對的. 問題一.

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