※ 引述《dieman31.bbs@ptt.cc ( )》之銘言：
: ※ 引述《simonmiho (Bear)》之銘言：
: : 沒記錯的話21a是 T7 promotor....應該是要先確定在該
: : host有無表現吧...... 有 Ab 的話就要先試..再去看是不是
: : 用His or GST 主要是便利purify and soluble.....
: : 我覺得先改善induction 的condition為主..
: 痾 我最近遇到一個超奇特的問題
: 就是我以前養細胞破蛋白來跑western
: 大部分蛋白濃度都是在2~8 micro gram / micro leter
: 可是我上次抽出來的那個蛋白 我測濃度的時候 竟然高到嚇人
: 我幾乎稀釋一千倍已經10次了 (意思是我總共稀釋了10的30次方倍)
: 我取 1 micro leter細胞蛋白 加上 999 micro leter的 lysis buffer稀釋
: 就這樣連續稀釋總共 稀釋了10次 也就是原蛋白濃度稀釋了 10的30次方倍
: 請問一下各位大大 我是不是哪裡出問題啦
: 因為我protein assay的 od值 都比我standar最高的還亮
: 我真是搞不懂是真的他蛋白濃度就是這麼高 還是我lysis的地方出問題呢
My wild guess is the incompatibility of protein assay with the detergent
in your lysis buffer...
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討論串 (同標題文章)
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