Re: [問題]如果蛋白表現量不夠
※ 引述《simonmiho (Bear)》之銘言：
: ※ 引述《McRay (西施就是愛的天使)》之銘言：
: : 如題~
: : 使用pET21a + BL21(DE3)系統 NdeI and HindIII這組酵素
: : Without any fusion tag
: : 實驗室有兩個學弟表現他們的蛋白量都蠻大的
: : 但是我這個蛋白在這系統表現量很低，連inclusion body都沒有
: : 定序的結果確定是對的
: : 問題一
: : 如果加了His-tag or T7-tag or GST會改善嗎?
: : 問題二
: : 如果要clone到另一個plasmid 有沒有建議使用的plasmid呢?
: 沒記錯的話21a是 T7 promotor....應該是要先確定在該
: host有無表現吧...... 有 Ab 的話就要先試..再去看是不是
: 用His or GST 主要是便利purify and soluble.....
: 我覺得先改善induction 的condition為主..
痾 我最近遇到一個超奇特的問題
就是我以前養細胞破蛋白來跑western
大部分蛋白濃度都是在2~8 micro gram / micro leter
可是我上次抽出來的那個蛋白 我測濃度的時候 竟然高到嚇人
我幾乎稀釋一千倍已經10次了 (意思是我總共稀釋了10的30次方倍)
我取 1 micro leter細胞蛋白 加上 999 micro leter的 lysis buffer稀釋
就這樣連續稀釋總共 稀釋了10次 也就是原蛋白濃度稀釋了 10的30次方倍
請問一下各位大大 我是不是哪裡出問題啦
因為我protein assay的 od值 都比我standar最高的還亮
我真是搞不懂是真的他蛋白濃度就是這麼高 還是我lysis的地方出問題呢
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.90.33
推
02/28 00:15, , 1F
02/28 00:15, 1F
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