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討論串[問題] pGEM不是應該很好接的嗎~!?
共 4 篇文章
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#4
Re: [問題] pGEM不是應該很好接的嗎~!?
推噓3(3推 0噓 1→)留言4則，0人參與, 最新作者bioeric (123)時間18年前 (2007/08/25 21:42), 編輯資訊
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整個實驗中的關鍵點很多個. 1.先檢查看看PCR使用的Polymerase是否不含proofreading能力. 最近很多價廉物美的ploymerase 都有proofreasding功能了. 拿錯的話 PCR product的末端A就不會加上了. 當然拿去與T-vector ligation會摃龜
(還有140個字)
#3
Re: [問題] pGEM不是應該很好接的嗎~!?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者tilapia.時間18年前 (2007/08/12 23:37), 編輯資訊
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可用EcoRI等enzyme切切看,跑電泳後看size是否有改變. pGEM vector在supercoil下可能會跑出2Kb的size. --. ╭──── Origin:<不良牛牧場> bbs.badcow.com.tw (210.200.247.200)─────╮│ ↘ Welcome t
#2
Re: [問題] pGEM不是應該很好接的嗎~!?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者tilapia.時間18年前 (2007/08/12 23:27), 編輯資訊
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※ 引述《chougham.bbs@ptt.cc (&&)》之銘言：. 我的經驗是經過gel elute的話,PCR product兩端的A可能會掉大部分. 我建議gel elution的產物另作A-tailing. ligation只要在室溫1小時就夠了.正常來說可長100-200 colonie
(還有25個字)
#1
[問題] pGEM不是應該很好接的嗎~!?
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者chougham (&&)時間18年前 (2007/08/12 22:48), 編輯資訊
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我是用Promega 的 pGEM-T easy Vector system. 我要的片段在之前已經利用上面提到東西接起來了~3k vector+1k insert. 現在要利用PCR~來換我insert兩端的切位~. 又因為~我的template是pGEM. 所以為了防止transform後被原來
(還有835個字)
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