Re: [求救] Hif1 alpha看不到band
※ 引述《jas123654 (jack)》之銘言：
: 如標題
: 小弟目前要針對hif1 alphe做western
: 但是一直看不到band
不知道您是用哪種方式進行hypoxic treatment?
如果是用hypoxia chamber的話收lysate的時間就需要越短越好
: 小弟實驗室在收lysate是先加PBS
: 收到沉澱物後才加lysus buffer(RIPA NaF PI Na3VO4)
: 爬了下舊文 似乎有人覺得應該先加lysis buffer
: 我覺得是不是用PBS刮細胞的時候我的Hif1就被degrade光光了
: 不知道有沒有高手能解惑的?
我的作法是先用足量的cold PBS很快的wash過一次,然後直接將lysis buffer加到culture plate中
將細胞打破後再把lysate收下來。
在我的認知中HIF1a就是一個對環境氧氣非常敏感的蛋白所以所有動作當然是越快越好。
: P.S. CoCL2作為positivve control有押出來漂亮的band
: 所以可以排除跑膠 transfer 抗體 ECL的
如果可以附圖的話會更好
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◆ From: 124.8.142.142
推
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