[求救] Hif1 alpha看不到band

看板Biotech作者 (jack)時間10年前 (2013/08/27 00:16), 編輯推噓3(3推 0噓 5→)
留言8則, 4人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
如標題 小弟目前要針對hif1 alphe做western 但是一直看不到band 只有加了CoCl2的positive control有強烈的band control(什麼藥物都不加) 以及加藥組(加Fascaplysin)的完完全全沒有band 小弟實驗室在收lysate是先加PBS 收到沉澱物後才加lysus buffer(RIPA NaF PI Na3VO4) 爬了下舊文 似乎有人覺得應該先加lysis buffer 我覺得是不是用PBS刮細胞的時候我的Hif1就被degrade光光了 不知道有沒有高手能解惑的? P.S. CoCL2作為positivve control有押出來漂亮的band 所以可以排除跑膠 transfer 抗體 ECL的問題 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.169.212.59
推
08/27 01:02, , 1F
你確定你的treatment有起作用嘛!?HIF1α是inducible的
08/27 01:02, 1F
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08/27 01:02, , 2F
一般normal情況下本來就看不到HIF1α表現
08/27 01:02, 2F
推
08/27 01:17, , 3F
針對你的本文,你也可以試著直接lysis buffer刮細胞
08/27 01:17, 3F
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08/27 01:19, , 4F
或是用trypsin to detach cells
08/27 01:19, 4F
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08/27 01:22, , 5F
另外一樓講的可能性也很高
08/27 01:22, 5F
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08/27 02:22, , 6F
postive control明明有看到,標題卻說沒看到
08/27 02:22, 6F
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08/27 02:28, , 7F
沒看到band很明顯不是收lysate的問題,而是你沒加CoCl2
08/27 02:28, 7F
小弟PTT首PO 已經補充一些資訊 請見諒 ※ 編輯: jas123654 來自: 140.112.58.20 (08/27 08:00)
推
08/27 10:03, , 8F
想請問是用哪一家的抗體呢? THX~
08/27 10:03, 8F
一抗是BD的 編號610959 網路上好像蠻推這隻的 ※ 編輯: jas123654 來自: 140.112.58.20 (08/27 10:21)
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