Re: [求救] HIF-1a 的western 條件
不好意思，借標題想問一下抽RNA的條件
我是用頭頸癌的細胞(重複paper的實驗)和肝癌細胞，在低氧濃度下生長
抽RNA，用qPCR觀察HIF-1A的表現量
理論上和control相比(normoxia)應該是要增加的
可是一直做不出來，延長天數也完全不見HIF-1A增加
我擔心是在收trizol的過程中，HIF-1A已經degrade了
想請問一下板上有人也是抽RNA觀察HIF-1A的嗎？
有什麼地方需要別注意或是有什麼方法可以避免HIF-1A degrade的？
先謝謝大家 :)
※ 引述《Basketball (future)》之銘言：
: 最近在跑HIF-1a
: 不知道是不是transfer的問題還怎樣
: 一下壓得出來同樣sample同樣condition又壓不出來
: 不知道版上是否也有人在跑HIF-1a的能否給我些意見
: 我使用是8%下膠 3%上膠
: transfer是使用濕式 400mA 70分鐘 (實驗室學姐之前用此條件跑iNOS 130KDa都有跑出來)
: gel用comassin blue染後確定有transfer過去
: memb.用麗春紅染有淡淡的protein(所以不知道是不是transfer條件不好?)
: 壓出來有時候有 有時候沒有
: ECL 也用過advance的 也壓不出來
: sample 每well load 50ug(是細胞的 所以應該算load夠多了)
: 總之 請有在跑HIF-1a的給我些建議
: 謝啦.
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