[求救] HIF-1a 的western 條件

看板Biotech作者 (future)時間16年前 (2009/08/06 12:06), 編輯推噓3(3推 0噓 12→)
留言15則, 6人參與, 7年前最新討論串1/4 (看更多)
最近在跑HIF-1a 不知道是不是transfer的問題還怎樣 一下壓得出來同樣sample同樣condition又壓不出來 不知道版上是否也有人在跑HIF-1a的能否給我些意見 我使用是8%下膠 3%上膠 transfer是使用濕式 400mA 70分鐘 (實驗室學姐之前用此條件跑iNOS 130KDa都有跑出來) gel用comassin blue染後確定有transfer過去 memb.用麗春紅染有淡淡的protein(所以不知道是不是transfer條件不好?) 壓出來有時候有 有時候沒有 ECL 也用過advance的 也壓不出來 sample 每well load 50ug(是細胞的 所以應該算load夠多了) 總之 請有在跑HIF-1a的給我些建議 謝啦. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.93.172
推
08/06 13:05, , 1F
我沒跑過,不過會不會是抗體的問題?放個positive control看看
08/06 13:05, 1F
→
08/06 14:14, , 2F
hif-1a 在normoxia下本身就會被degrade 你的處理是？
08/06 14:14, 2F
推
08/06 23:10, , 3F
同意樓上,大部分細胞在正常狀態下培養是偵測不到HIF的
08/06 23:10, 3F
→
08/07 00:47, , 4F
喔 我的條件是在缺氧的情況下 而且我也有做DFO組
08/07 00:47, 4F
推
08/07 13:21, , 5F
實驗室的學弟也有作HIF-1a 開始收不到HIF-1a protein
08/07 13:21, 5F
→
08/07 13:21, , 6F
的原因是因為他在lysis時就 degrade光了 所以來收的方法
08/07 13:21, 6F
→
08/07 13:23, , 7F
改成Lysis buffer加到dish上 後用刮的收完後 馬上離心
08/07 13:23, 7F
→
08/07 13:24, , 8F
全程4度C 且離心時間縮短成15min 之後馬上煮起來跑膠
08/07 13:24, 8F
→
08/07 13:24, , 9F
你可以參考看看
08/07 13:24, 9F
→
08/07 16:08, , 10F
恩恩感謝樓上的建議我會試看看的 那可以再請問一下
08/07 16:08, 10F
→
08/07 16:09, , 11F
你學弟 tansfer的條件嗎? 謝啦
08/07 16:09, 11F
→
08/07 16:31, , 12F
Transfer的條件我們家是semi-dry 50mA/片 for 1.5hr
08/07 16:31, 12F
→
08/07 16:33, , 13F
我覺得應該不是transfer的問題 是HIF-1a本來就很難壓
08/07 16:33, 13F
→
11/11 01:39, , 14F
我覺得應該不是tran https://daxiv.com
11/11 01:39, 14F
→
01/03 16:59, 7年前 , 15F
Transfer的條件 https://muxiv.com
01/03 16:59, 15F
‣ 更多 Basketball 的文章
文章代碼(AID): #1AUbQxua (Biotech)
討論串 (同標題文章)
以下文章回應了本文 (最舊先)：
完整討論串 (本文為第 1 之 4 篇)：
排序： 最新先 | 最舊先 | 留言數
在新視窗開啟完整討論串 (共4篇)
‣ 更多 Basketball 的文章
文章代碼(AID): #1AUbQxua (Biotech)