Re: [求救] 菌長出來裡面什麼都沒有

看板Biotech作者 (Phil-Ku)時間13年前 (2011/01/21 18:02), 編輯推噓13(13推 0噓 18→)
留言31則, 12人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
※ 引述《FENOR (FENOR)》之銘言： : 這一個月來每次做clone都遇到這樣的事情， : 在ligation並且transform進去之後到菌落長出來這一個步驟都沒有問題， : 可是每次用長出來的菌落來抽mini-prep，抽出來的產物digest後拿去跑膠， : 每次跑都是空的，連vector都沒有， : 這是怎麼一回事啊@@ : 我已經快被這樣的情況搞死了.....總覺得我不太適合這一行。 剛好前一陣子也碰到同樣的問題 也是跟原po類似，甚麼變因感覺都考慮過了 結果之後問題出在抗生素... 1.抗生素是用甚麼水去泡的 我那時候是用一次水，後來用D2水，再後來用D2滅菌水 2.抗生素泡完有過濾嗎(用小飛碟) 3.就算是新買的抗生素 強如Kan+，也有可能失效：藥品保存的問題 永遠不要覺得你有乖乖用別人也有乖乖用XD(建議去別家借一點來試試) 總之，最後成功的條件是，D2滅菌水+0.22小飛碟+兩倍劑量 終於成功的挑到 一點經驗分享提供給原PO參考^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97
推
01/21 18:46, , 1F
推~ 不過你一開始居然用一次水,真猛!
01/21 18:46, 1F
推
01/21 21:07, , 2F
用一次水這點來說 你真的很屌...
01/21 21:07, 2F
推
01/21 22:21, , 3F
@@" 我是用滅菌過的二次水配 不過沒有再過濾
01/21 22:21, 3F
推
01/22 10:54, , 4F
好奇地問 為何一次水不行? 過濾的目的跟功用為何?
01/22 10:54, 4F
→
01/22 12:32, , 5F
孩子 如果一次水就可以就不用有二次水這種東西了
01/22 12:32, 5F
→
01/22 12:32, , 6F
有些東西滅一次死不了 飛碟是用很小的孔隙濾掉微生物
01/22 12:32, 6F
推
01/22 13:19, , 7F
所以為甚麼一次水不行?
01/22 13:19, 7F
→
01/22 13:21, , 8F
甚麼東西死不了?
01/22 13:21, 8F
推
01/22 15:12, , 9F
重點應該在~抗生素是不是無菌的~然後能不能work~!
01/22 15:12, 9F
→
01/22 15:19, , 10F
一次水或二次水在這種實驗裡面應該是沒多大的影響~!
01/22 15:19, 10F
推
01/22 17:55, , 11F
再問一下. 抗生素裡為何會有菌 能耐 stock 中的高濃度抗生素?
01/22 17:55, 11F
推
01/22 18:43, , 12F
視抗生素的作用和何種菌 還有titer 每一種菌(細菌/真菌)
01/22 18:43, 12F
→
01/22 18:43, , 13F
能耐受的抗生素種類不同 劑量也不同
01/22 18:43, 13F
→
01/22 18:44, , 14F
要是對菌沒作用的話 stock的濃度也殺不死
01/22 18:44, 14F
→
01/22 18:45, , 15F
所以才有所謂超級細菌 萬古黴素都殺不死的那種...
01/22 18:45, 15F
推
01/22 22:28, , 16F
我也覺得為啥用一次水不行啊？ 雖然我也都用二次水
01/22 22:28, 16F
推
01/22 23:07, , 17F
沒有不行阿 自來水也行阿
01/22 23:07, 17F
→
01/23 09:07, , 18F
雖然都用2次水但1次水應該也沒問題 感覺除了藥品存放外 其
01/23 09:07, 18F
→
01/23 09:08, , 19F
他因素應該都非常微小 有做過微生物實驗的應該瞭解 操作未
01/23 09:08, 19F
→
01/23 09:08, , 20F
必需要Hood 往往在實驗桌上開酒精燈操作了 所以污染並不是
01/23 09:08, 20F
→
01/23 09:09, , 21F
這麼容易發生的
01/23 09:09, 21F
推
01/23 10:06, , 22F
還要考亮你用的菌株本身抗受性問題 有的菌株就是比較耐
01/23 10:06, 22F
→
01/23 10:07, , 23F
或者抗生素保存不當或品質不夠好 才會效率下降
01/23 10:07, 23F
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01/23 10:08, , 24F
二次水一次水 有無過filter 我是覺得case by case
01/23 10:08, 24F
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01/23 10:09, , 25F
最大問題還是在藥品當下的品質 還有你的菌株
01/23 10:09, 25F
推
01/23 19:56, , 26F
抗生素 plasmid本身 reagent 要抓出問題就是做control吧
01/23 19:56, 26F
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01/23 19:57, , 27F
plasmid可能是hi copy lo copy 有的更詭異本來就不好抽
01/23 19:57, 27F
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01/23 19:58, , 28F
就這樣跑上來問並沒有訓練到你獨立抓出問題的能力...
01/23 19:58, 28F
推
01/24 00:28, , 29F
其實問題在我發問後過了幾個小時就找出來了...至少是找出
01/24 00:28, 29F
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01/24 00:29, , 30F
其中一個，當時是在考慮抗生素的問題。所以當時用了新泡
01/24 00:29, 30F
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01/24 00:29, , 31F
的kana去篩選之後就成功的挑出了有construct的clone
01/24 00:29, 31F
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文章代碼(AID): #1DELcSqs (Biotech)
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