Re: [求救] BCA與Bio-Rad protein assay kit....
※ 引述《azywu ()》之銘言：
: 各位版友你們好，小弟是個非生科相關科系的研究生，
: 自認為沒有深厚的分子生物背景，所以請大家多多包含。
: 小弟最近遇到了一個實驗上的問題，自己感覺到相當的奇怪，
: 實驗目標是針對某株細菌在培養的過程中監測上清液中的蛋白物質，
: 小弟使用了BCA protein assay kit在不同的培養時間採樣分析，
: 上清液都經過了0.22過濾頭過濾掉懸浮的細菌才分析，
: 控制組的培養基也有進行同步的蛋白物質監測，
: 實驗的結果顯示培養時間越長上清液中會累積蛋白物質，
: 而且以BCA protein assay所分析到的濃度相當的高，
: 不過小弟困惑的是，小弟以相同的樣品，改以Bio-Rad protein assay kit分析，
: 其結果竟然是上清液中完全沒有任何的蛋白質物質，
: 在595 nm的吸光值跟標準品的0點差不多。
: 雖然BCA的偵測靈敏度(0-100 ug-BSA/ml-OK)
: 相對的較Bio-Rad(200-900 ug/ml-OK)的方法來的高，
: 不過從實驗結果來看，BCA分析到的結果上清液的蛋白物質濃度應該很高，
不知道你用BCA測的很高是有多高？
你應該有換算出sample的濃度吧？
: 所以應該不至於低於Bio-Rad方法的偵測極限，
就你所說得靈敏度來看
BCA: 0-100 ug/ml
Bio-Rad: 200-900 ug/ml
中間100-200很明顯有個落差在
如果sample有110 ug/ml或190 ug/ml
對BCA來說都是爆表 但對Bio-Rad來說都是不足量
所以你怎麼會覺得sample的濃度不會低於Bio-Rad的最低極限200 ug/ml？
: 這個問題真的讓小弟很苦惱，不知道該相信哪一個分析方法的結果....
: 不知道各位版友有沒有遇過相似的問題，或是可否給小弟一點建議或是解釋?
: 先感謝各位版友的協助!!
還有 實驗做法可以再說明清楚一點
因為就算是同一套測濃度的試劑
裡面也有不同的做法 大量跟微量的做法是有差異的
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