[求救] 細胞污染
我的問題是最近忽然間發生的...
先描述一下我的培養情形:
我養的細胞是乳癌細胞株MCF-7,
使用DMEM/F12培養,本身不加抗生素,
然而因為細胞株是Tet-off system,
所以有在maintain中加入2μg/ml的Doxycycline(Dox)
在實驗起始時以PBS wash 而後分成有Dox與單純以DMEM/F12無抗生素者培養,
誘導目標蛋白表現...
----以上是常態培養情形供參考
問題來了,
我上次是有發現我實驗起始後誘導到一半(全程應6天,但發生在第3天)
細胞會長得很快,而後就死了,DMDM/F12都變成黃色的,但是是澄清的,
細胞在盤底呈現一種白雲狀(就是形狀很像一塊一塊的白雲,但沒有飄起來),
如果去移動dish,這時細胞就會飄起來,使medium變成沙沙的,
這時候因為移動dish鏡檢有晃到,medium就變成混濁的了。
但是有含Dox的那一組則很正常(看起來)
(那時我懷疑是自己一開始種太多,而抗生素會稍微影響細胞生長,
誘導需6天,可能因此dish太滿)
於是我重新按照一樣的方法再作一次,發現一模一樣的事又發生了,
心裡很毛,所以重新解凍了,
新的細胞我解凍看起來很正常,貼的很好,
繼代一次之後,
我試著種較少細胞數,但隔天去看卻發現細胞不對勁,
我養的8盤DMDM/F12一樣都變成黃色的(但是澄清),
細胞在盤底再次呈現一種白雲狀,
移動dish鏡檢有晃到,medium就變成混濁的了。
鏡檢的時候看到的是有點霧霧的,只有少量細胞貼在上面。
請問各位先進,
這是代表什麼種類的污染?是漿霉菌嗎?
或者有什麼簡易的方法可確定?
另如何試著去看PBS和DMEM是否污染?
抱歉問題有點多,
謝謝各位。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.154.12
※ 編輯: tincta 來自: 163.15.154.12 (04/13 16:43)
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