Re: [求救] Purification fungi genomic DNA

看板Biotech作者MrCAKE (Keep Working)時間16年前 (2010/03/21 02:17)推噓0(0推 0噓 7→)

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我以前常抽絲狀真菌的DNA和RNA 你說的牛樟芝我也有抽過我覺得你應該先告訴大家你如何得知DNA量太少以及老闆如何判斷片段太小 DNA的用途為何?(如果只是要PCR 事實上隨便抽抽就可以了) 如果不提供這些資訊的話真的很難幫上你的忙 ※ 引述《ko363630 (打雜路人甲)》之銘言： : 老闆最近要我抽牛樟芝的gDNA : 我從自家的分生聖經以及學姐之前的做法下去做 : 雖然有很成功的抽出來 : 但是濃度卻是相當低，老闆說，可能是抽的時候DNA被切碎太多 : 但是我自己覺得不太可能，可能是牛樟芝用的量太少(取1g抽) : 這是我們的實驗步驟 : 1.濾紙抽氣過濾(無菌水清洗) : 2.液態氮研磨 : 3.每克菌絲加入4ml extration buffer : 4.add 4ml phenol/chloroform : 5.centrifuge(4oC、10000rpm、10min) : 6.add 1/10 3M Sodium acetate(pH5.2) and 100%EtoH to supernatant at -20oC for : 2hr : 7.centrifuge(10000rpm、10min) desupernatants in RT : 8.add 20mM Tris-HCL(pH:8.0) : 9.add 1ug RNase in 37oC 30min 150rpm : 10.add protease K (final concentration 150mg/ml) at 37oC for 60min : 11.add phenol volume mix, centrifuge(4oC 12000rpm 10min) : 12.add 1/10 3M Sodium acetate 3x voulme 100% EtoH (Final concentration 70%) : at -20oC 30min : 13.centrifuge(4oC 14000rpm 25min) : 14.add 10mM Tris-HCL(pH:8.0) : 這是我的實驗流程(第一次嘗試英文請不要care>"< 我才大二，英文還不好) : 老闆說，這次抽出來的片段碎掉很多。之前曾想過改用lysis buffer 來破菌。 : 自己上網找qaigen、promega 的protocol但是找到大部分都是關於blood、trusses、 : plant、yeast(同樣都是fungi，但是不知道能不能用) : 想請各位板上的大大不知道能不能提供一些經驗 : (要買kit的先不要好了= = 老闆聽到要花錢不知道會不會殺了我>"<) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 124.8.67.177

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