[求救] 有關CD11b免疫組織染色
不曉得板上是否有同仁使用BD的rat anti-mouse CD11b (Mac-1)
最近購入要染小鼠腦冷凍切片的microglia,
但不曉得為什麼就是染不出來,目前使用的方式是以ABC+DAB呈色.
不曉得有沒有人有相關成功的經驗,麻煩不吝指教~
目前使用的方式如下:
1.切完的片先放入-20度冷藏
2.取出片子先Aair dry
3.PBS wash X 3, 每次五分鐘
4.3% H2O2 in methanol, 半個鐘頭
5.wash方式同步驟3
5.接著上一抗,濃度為100X稀釋, o/n
6.PBS wash X 3,每次五分鐘
7.上2抗,放室溫一個鐘頭
8.wash方式同步驟3
9.加入ABC,45分鐘
10.最後以DAB呈色
是抗體出問題?還是步驟出問題?
目前所使用的2抗為biotinylated anti rat,已放了將近7年的時間,
不曉得是否會有影響?
不曉得有沒有人願意分享經驗,麻煩了~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 115.43.209.159
※ 編輯: will008w 來自: 115.43.209.159 (03/05 00:37)
推
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