Re: [求救] 有關CD11b免疫組織染色
目前我已經好像找出問題了,
我染的CD11b似乎會受到固定液的影響而染不出來.
我想請教大家一下,
我做的是冷凍切片,
之前都是先以saline灌流後再接著以4%PFA灌流,灌完後取出腦組織,
然後放到蔗糖溶液脫水,脫水完後以OCT包埋,切片.
若是現在想不用PFA灌流的話,
是不是可以直接以saline灌流完後,取出組織泡在蔗糖溶液中,脫完水後以OCT包埋.
切片完後改以postfixation的方式固定.
這樣子的protocol不曉得是否可行?
麻煩大家了!
※ 引述《will008w (小花)》之銘言：
: 不曉得板上是否有同仁使用BD的rat anti-mouse CD11b (Mac-1)
: 最近購入要染小鼠腦冷凍切片的microglia,
: 但不曉得為什麼就是染不出來,目前使用的方式是以ABC+DAB呈色.
: 不曉得有沒有人有相關成功的經驗,麻煩不吝指教~
: 目前使用的方式如下:
: 1.切完的片先放入-20度冷藏
: 2.取出片子先Aair dry
: 3.PBS wash X 3, 每次五分鐘
: 4.3% H2O2 in methanol, 半個鐘頭
: 5.wash方式同步驟3
: 5.接著上一抗,濃度為100X稀釋, o/n
: 6.PBS wash X 3,每次五分鐘
: 7.上2抗,放室溫一個鐘頭
: 8.wash方式同步驟3
: 9.加入ABC,45分鐘
: 10.最後以DAB呈色
: 是抗體出問題?還是步驟出問題?
: 目前所使用的2抗為biotinylated anti rat,已放了將近7年的時間,
: 不曉得是否會有影響?
: 不曉得有沒有人願意分享經驗,麻煩了~~
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