Re: [求救] 切片破洞很久了!!!請幫幫我
※ 引述《pei24 (黑哥)》之銘言：
: To 前輩們...
: 我把我切片染色的照片 po 在 http://www.wretch.cc/album/peipink
: 麻煩前輩們給予指教.....
: 我實驗室的perfusion protocol為以下
: saline 50 ml(流速約為 6 ml/min)
: 4% PFA 100-200 ml(流速約為 4 ml/min)
: 10% sucrose 50ml (流速約為 4 ml/min)
: 取出 spinal cord 之後會把 L4-L6 切斷
: 泡20% sucrose 待下沉後改泡 30% sucrose 約3天
: 用O.C.T包埋,放在-20度等O.C.T變白後再放在-80
: 至於切片時我的刀片每換一個組織我就換新的刀片
: 在切片的過程中也會不斷的換刀片的位置...
: 請給予指教!!
因為沒有明視野的照片 還有照片倍率？
其實有點難看出破洞的地方到底是破洞還是空洞
我是沒有切過脊椎
不過我有一個小小問題想請教
切片組織是脊椎
那做perfusion的意義在哪邊？
我知道要做一些充血組織或是血管內皮是一定要灌流
可是脊椎那邊有血管嘛？
我的意思是灌流的成效可以到達spinal cord嘛
如果不行,那是不是應該改成儘快取出組織泡入固定液？
另外取組織跟固定過程中
是不是有都維持在低溫的狀態呢
因為我自己的經驗
如果組織離體超過5分鐘沒儘快固定
在tem下就常常會看到很多lysis了
這會不會是你的破洞來源 其實我也沒啥把握啦
提出這些看法
看看大家還有沒有其他的建議呢
JR
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.126.67.14
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 3 之 5 篇)：