※ 引述《drave (( ￣ c￣)y▂ξ)》之銘言：
: 有學過普通的生物化學
: 但都是粗淺地點到為止...
: 想問一下
: 1.
: 萬一對未知序列跑PCR的時候
: 那要如何知道要用何種primer?
: 這樣頭端的鹼基是未知 不就跑不起來了?
: 2.
: 接著是RFLP
: 最後的步驟不是要用探針去hybrid
: 探針不是設計出來的嗎...怎麼知道要設計怎樣的探針
: 才能與那些片段hybrid
: 還是說做RFLP的時候待測DNA也要是已知???
這講的是古典的RFLP,實際上現在幾乎所有人都做PCR-RFLP
原理是先把已知的片段用PCR擴增出來在用限制酵素切割觀察是否有點突變
所以當然必須知道目標序列為何
: 3.
: 為什麼AFLP比RFLP更能判讀出差異???
: AFLP不是就等於RFLP+PCR?
AFLP是"先用限制酵素切gDNA,再用接合酵素把設計好的核酸接合子黏到切點上
最後再用和接合子互補的引子跑PCR"
PCR-RFLP是"先做PCR,再用限制酵素切PCR產物"
: RFLP缺點在於限制酵素切的片段太過多 導致條帶可能會連起來
: 這樣AFLP跑出來不會有這種情形嗎
如上所述,AFLP酵素切的範圍是"整個基因體",所以條帶遠多於PCR-RFLP
一般來說,RFLP是針對已知的序列來偵測點突變
AFLP是對序列資訊未知的情況進行研究,兩者對象完全不同
(AFLP光看上面要對整個基因體又切又黏就知道酵素用量會用到破表,
如果發現條帶數太複雜不能用一般膠體分析,還得把引子標螢光跑毛細管電泳...
一言以蔽之,這是一個很貴的技術,所以一般能用RAPD還是用RAPD)
: 還是我哪裡搞錯了?
: 這樣PCR-RFLP和AFLP有啥不同= ="?
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推
04/02 02:23, , 1F
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