Re: [求救] western blot transfer 效率不好

看板Biotech作者 (大姑)時間17年前 (2008/08/14 21:16), 編輯推噓8(8推 0噓 8→)
留言16則, 5人參與, 7年前最新討論串3/4 (看更多)
現在有找到一些方法 1.降低SDS PAGE% 不過我現在已經是用10% 2.transfer 久一點 之前都只有兩小時，今天已經在試O/N 3. buffer 加0.1% SDS 以及降低methanol濃度 如果膜是PVDF的話，可以不加methanol 4. wet 效率比semi-dry好 我是本來就用wet的了 謝謝各位大大的幫忙 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.24.253.22
推
08/15 00:27, , 1F
我跑的ATM 350kd 用6%膠跑也要3小時...
08/15 00:27, 1F
→
08/15 00:28, , 2F
wet transfer 20%MeOH 0.1%SDS 其他一樣 還是搞不出
08/15 00:28, 2F
→
08/15 00:29, , 3F
來(transfer 3hr) 只好寄望用買的系統了Orz
08/15 00:29, 3F
推
08/15 00:34, , 4F
ATM跟1981不用這麼麻煩,7%, 160V,70min,transfer用60V,4h或
08/15 00:34, 4F
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08/15 00:37, , 5F
或25V,o/n這種一般wet的條件都很好做,不會難,別被kda嚇到了
08/15 00:37, 5F
推
08/15 00:51, , 6F
transfer以tris-glycine+15%methanol,NC membrane,不加SDS
08/15 00:51, 6F
推
08/15 01:00, , 7F
25V O/N壓 這個可以試試
08/15 01:00, 7F
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08/15 01:01, , 8F
電泳會跑這麼久是因為marker最大到250 還在猶豫要不
08/15 01:01, 8F
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08/15 01:01, , 9F
要定invitrogne那支到500kd的..
08/15 01:01, 9F
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08/15 01:02, , 10F
再不行就要把cell signaling Ab丟了- -
08/15 01:02, 10F
推
08/15 01:20, , 11F
請問B大, 你用的ATM Ab是哪一家賣的啊~~
08/15 01:20, 11F
推
08/15 02:19, , 12F
Genetex, 2C1
08/15 02:19, 12F
推
08/15 20:44, , 13F
我以前做talin 250Kd,150mA兩小時,transfer非常的好...
08/15 20:44, 13F
推
08/16 00:08, , 14F
B大, Genetex這支 ATM Ab可以做IHC(P)嗎?
08/16 00:08, 14F
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11/11 00:55, , 15F
或25V,o/n這種一 https://muxiv.com
11/11 00:55, 15F
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01/03 16:43, 7年前 , 16F
我跑的ATM 350k https://daxiv.com
01/03 16:43, 16F
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文章代碼(AID): #18f30u-7 (Biotech)
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