Re: [討論] semi-dry transfer的條件應該怎麼抓？
※ 引述《crement (cometoseeme)》之銘言：
: 買0.22吧？！這個不太會穿過去。
: 除非有特殊理由，不然好像大家都用這種。
: 可以用那種mutlicolor protein marker。
: 用這個觀察transfer的效果，
主要是沒有現成的.22，反而.45有兩大卷，所以實驗室沒打算買新的(NC也沒用完)
prestain marker我有想過，問題是只要顏色變淡很可能就看不到了，畢竟人眼
的靈敏度不太可能那麼高。
話說我偷懶只用CuCl2染.....感覺靈敏度還是不夠。
: 順便看看不同大小protein的效果。
: 因為不太會轉穿過去，用semidry比較擔心是轉久了乾掉，membrane會『燒到』。
: 之前一般的gel我們用0.8mA/cm2，轉兩個小時，
: 非常乾淨，但是很久。
: 或是1mA/cm2，一小時也差不多，
: 同事這個condition45分鐘，一般大小也都可以過去。
我現在已改用three buffer system，.75cm gel都用↓
0.5mA/cm2 5min(約6~10V) + 1.5mA/cm2 15~20min(最後約18V)，
(有跑過2.5mA，gel也不會熱，但轉印槽有限制要25V以下，所以放棄)
gel上的prestain marker確實看不到了，但我希望能更仔細確認，找到最佳條件
才好把整個流程教給實驗室其他小組。
畢竟我們有同時跑40kD和250kD的，也有sample非常稀有的小組。
※ 引述《vickwanlei (黑色禮堂)》之銘言：
: 分子量大小是多少阿?
: 分子量小的會把時間縮短
: 我試過用.45 PVDF疊兩層 抓各時間點
: 轉過頭你就會看見下面那一張也會有
嗯....我是有點想和其他實驗室要個一兩張.22 PVDF啦，不過真的不方便的話，
就照你的方法.45疊兩張吧。
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太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，
這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。
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