Re: [求救] touchdown pcr

看板Biotech作者 (等待)時間17年前 (2008/06/16 14:53), 編輯推噓3(3推 0噓 9→)
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※ 引述《bbiioo (梅子)》之銘言： : 想請問這個pcr : 是什麼情況下可以使用 : 是 想要增加產物產量嗎? : 因為現在在進行的pcr : 還在試他的最佳的Tm : 老師是建議跑gradient : 我是想說利用這個方法找 : 不知道可不可以 : 我是要從chromosome DNA 找出目標基因來 : 如果說用TOUCHDOWN這個方法 : 是每一個cycle降0.5度吧? : 那範圍怎麼設呢?? primer 黏合溫度一開始比Tm值 高15~18度 每cycle降1度 直到溫度到比Tm值低五到六度 -- 如果活在世上只是扮演著大家所期望的自己 那扮演好了又怎樣 不如靜靜的讓自己消失吧 總是多餘的存在只是種荒謬的錯誤 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.223.228.164
推
06/16 20:32, , 1F
恩~我會試試的~~謝謝囉
06/16 20:32, 1F
推
06/20 17:27, , 2F
這是gradient吧?touchdown是要減少非專一性結合,2個溫差即可
06/20 17:27, 2F
→
06/21 19:28, , 3F
不對吧! touchdown是省找尋黏合溫度的時間
06/21 19:28, 3F
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06/21 19:35, , 4F
Nucleic Acid Res.(1991) 19: 4008
06/21 19:35, 4F
推
06/22 04:54, , 5F
恩...我這樣說好了,touchdown會使用的主要因素是要提高正確
06/22 04:54, 5F
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06/22 04:55, , 6F
的產物在你PCR product的量,使得你的最終正確的PCR產物
06/22 04:55, 6F
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06/22 04:56, , 7F
能在產物中佔有最大量,因此他前面的cycle只是為了要放大
06/22 04:56, 7F
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06/22 04:58, , 8F
"正確"的template而已,因為那是1991的文章了PCR技術也進步
06/22 04:58, 8F
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06/22 04:59, , 9F
了許多,以現在的技術而言可能不再需要作那麼多的測試就可作
06/22 04:59, 9F
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06/22 05:02, , 10F
所以除非特殊因素,不然你可以做幾個溫度就試得出來了
06/22 05:02, 10F
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06/22 05:04, , 11F
前面四句在文章內有提到,而且65度以上的專一度已經夠了
06/22 05:04, 11F
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06/22 05:05, , 12F
除非你的primer設計不良,不然二級結構在此溫度都已經解開了
06/22 05:05, 12F
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文章代碼(AID): #18LWt_YU (Biotech)
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