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討論串[求救] touchdown pcr
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#4
Re: [求救] touchdown pcr
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者threestars (等待)時間17年前 (2008/06/21 19:35), 編輯資訊
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因為黏合溫度有時不好找! 如果只要求有想要的東西. 應該不是什麼增加專一性的方法. 不過可以減少花費時間試 條件的時間. 可以參考. Touchdown PCR to circumvent spurious priming during gene amplification.. Nucleic Ac
#3
Re: [求救] touchdown pcr
推噓2(2推 0噓 1→)留言3則，0人參與, 最新作者davideason (Davideason)時間17年前 (2008/06/17 15:22), 編輯資訊
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粘合溫度最高達到73度?? 嘖嘖. 我不清楚您primers設計的方式與目的. 不過我猜. 如果是有要 引入限制媒的切位 請不要計算這幾個鹼基對的Tm. 回到正題. 一般我做Genomic PCR 只要微調PCR的條件 都可以很順利的有結果. 假設: primers 設計時的Tm=60度(切位引入'
(還有178個字)
#2
Re: [求救] touchdown pcr
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者davideason (Davideason)時間17年前 (2008/06/16 22:20), 編輯資訊
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1. 第一次de-nature 的時間拉長 because of genomic DNA. 2. 給primers 多一點時間黏合到target gene. 3. 先不要急著降低 粘合溫度. 4. 1st PCR 如果沒有band,直接拿來當2nd PCR的模板. 5. P完>作TA>送定序. 總之
#1
Re: [求救] touchdown pcr
推噓3(3推 0噓 9→)留言12則，0人參與, 最新作者threestars (等待)時間17年前 (2008/06/16 14:53), 編輯資訊
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primer 黏合溫度一開始比Tm值 高15~18度 每cycle降1度. 直到溫度到比Tm值低五到六度. --. 如果活在世上只是扮演著大家所期望的自己. 那扮演好了又怎樣. 不如靜靜的讓自己消失吧. 總是多餘的存在只是種荒謬的錯誤. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ Fr
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