Re: 有關his-tag純化
※ 引述《STEVENUA.bbs@bbs.Life.NCTU.edu.tw (星空下的神話)》之銘言：
: 想請問一下各位先進
: 在純化蛋白質中，我要純化his-tag的融合protein，使用的是Ni-NTA來純化，
: 想請教的部分就是：
: 1.為什麼buffer的ph值是保持在7.9呢?
PH值也會影響his_tag PROTEIN binding 但PH值只要7.4_到8都可以啊
不一定要在7.9。
: 2.binging buffer中有的會加入imidazole,這個物質不是只和histidine競爭Ni，為什麼
: 會用在binding buffer裡呢?(其實也想問一下binding buffer的功能是什麼)
低濃度的IMIDizole是用來洗去column非專一性的結合蛋白。
也可以再加入高濃度的NACL這樣最後收集的蛋白會比較純
: 3.elution buffer中有imidazole我能理解，可是washing buffer中為什麼也有呢?
: 實驗室使用的imidazole濃度分別為：
: 8X binging buffer：40mM imidazole
: 8X washing buffer：480mM imidazole
: 4X elute buffer：4M imidazole
: 求救一下了>"<
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◆ From: 219.68.86.29
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推
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