想請問一下各位先進
在純化蛋白質中,我要純化his-tag的融合protein,使用的是Ni-NTA來純化,
想請教的部分就是:
1.為什麼buffer的ph值是保持在7.9呢?
2.binging buffer中有的會加入imidazole,這個物質不是只和histidine競爭Ni,為什麼
會用在binding buffer裡呢?(其實也想問一下binding buffer的功能是什麼)
3.elution buffer中有imidazole我能理解,可是washing buffer中為什麼也有呢?
實驗室使用的imidazole濃度分別為:
8X binging buffer:40mM imidazole
8X washing buffer:480mM imidazole
4X elute buffer:4M imidazole
求救一下了>"<
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