Re: [討論] cloning
※ 引述《lblackpig (小黑豬)》之銘言：
: 我使用PCR的方式將目標基因p出來，將PCR product由gel純化出來，再將其與T voector
: 進行ligate，並進行transform。結果可以長出蠻多的colony。接下來想要將其clone到
: pEGFP-N1，使用enzyme將T vector上的gene切下並elute出來，同時也使用相同的enzyme
: 切pEGFP-N1(不過可能兩個切點太近，只有約4-50 bp，所以gel上並看不出被切下來的
: band，也不太確定有沒有切開），將兩者放在一起liagte，之後進行transform。但是
: 長出來的colony非常少，或者完全沒有，不管我的基因是600bp或1600bp，都是這樣，各
: 位有沒有任何看法？為何這樣的liagtion似乎好像效率不高？
有幾各可能 你參考看看
先決條件是 vector and insert處理都沒有問題
1.抗生素是否使用正確, pEGFP 記得是抗 kanamycin,不是常使用的Amp
2.competent cell efficiency太低, 多挑幾各或許可以挑到,
或是換好一點的 competent cell
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