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討論串[討論] cloning
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#6
Re: [討論] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者countonme (that's just me)時間18年前 (2008/03/26 18:03), 編輯資訊
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我認為TA效率高的原因可能是因為 TA ligation. 只需T與A一個mer之間的碰撞即可，且TA又是雙氫鍵，鍵能亦比CG低. 反觀像是RE digestion的steaky end多為四個mer. 所以就機率與鍵量來說ligation效率應該會比較高. ※ 編輯: countonme 來自:
#5
Re: [討論] cloning
推噓1(1推 0噓 3→)留言4則，0人參與, 最新作者imeating (sensitive)時間18年前 (2008/03/26 05:07), 編輯資訊
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1.就我個人經驗，PCR product做TA cloning時，. 這樣的ligation成功機率非常高，. 非常容易得到多且正確的colonies。. 但其他的steaky end ligation很少有如此高的成功率。. 所以你後來得到的colony數目不多實屬正常現象。. 不過我也不知道為什
(還有219個字)
#4
Re: [討論] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者heavenfree (xan)時間18年前 (2008/03/22 17:01), 編輯資訊
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可參考NEB關於T4 DNA ligase的FAQs，蠻有幫助的。. 網址:http://www.neb.com/nebecomm/products/faqproductM0202.asp#339. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 59.105.176.151.
#3
Re: [討論] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者newbeetle (平安就是福)時間18年前 (2008/03/21 00:22), 編輯資訊
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(不過可能兩個切點太近，只有約4-50 bp，所以gel上並看不出. 被切下來的band，也不太確定有沒有切開）. 針對這點 要不要查一下NEB的書. 1. 看哪一個enzyme先切比較好. 因為有的enzyme會需要旁邊有n個nucleotide才切的動. 2. 使用buffer濃度低的enzym
(還有134個字)
#2
Re: [討論] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者aaada (rex)時間18年前 (2008/03/20 23:57), 編輯資訊
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有幾各可能 你參考看看. 先決條件是 vector and insert處理都沒有問題. 1.抗生素是否使用正確, pEGFP 記得是抗 kanamycin,不是常使用的Amp. 2.competent cell efficiency太低, 多挑幾各或許可以挑到,. 或是換好一點的 competen
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