Re: [求救] 有關大量表達蛋白的問題
※ 引述《aggaci (情人節ㄧ直被閃)》之銘言：
: ※ 引述《artery (酸糖果)》之銘言：
: : 用E.coil來大量表達蛋白
: : 經由超音波破菌
: : 分離supernatant及pellet
: : 而所表達的蛋白可能位在supernatant 或pellet
: : 請問各位高手
: : 假設蛋白表達在pellet，想要讓蛋白轉成表現在supernatant
: : 有什麼方法或技巧？
: : ps：就我所知就是降低誘導的溫度，但是我試過30,28,16度
: : 但還是沒有成功，不曉得還有什麼該注意的
: : 或是其他小小技巧，請各位高手提供妙計
: : 謝謝！
: 1.換host 如Rosetta-gami (DE3)可以幫助雙硫鍵形成，
: 比較不會形成inclusion body
: 2.降低IPTG濃度甚至不加
: 3.菌養在低溫(16度)，shaking 慢一點
: 4.加些許ethanol，可以幫助誘導HSP表現幫助folding
: 5.fusion GST or MBP or GFP...可以有效幫助蛋白質變soluble protein
: 以上我都試過，5效果最好
: 除非不得已，不然別碰refolding
還有一個方法
可以試試 co-express E.coli Chaperon protein
像是 Gro-ES, Gro-EL
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