Re: [求救] 有關大量表達蛋白的問題
※ 引述《artery (酸糖果)》之銘言：
: 用E.coil來大量表達蛋白
: 經由超音波破菌
: 分離supernatant及pellet
: 而所表達的蛋白可能位在supernatant 或pellet
: 請問各位高手
: 假設蛋白表達在pellet，想要讓蛋白轉成表現在supernatant
: 有什麼方法或技巧？
: ps：就我所知就是降低誘導的溫度，但是我試過30,28,16度
: 但還是沒有成功，不曉得還有什麼該注意的
: 或是其他小小技巧，請各位高手提供妙計
: 謝謝！
1.換host 如Rosetta-gami (DE3)可以幫助雙硫鍵形成，
比較不會形成inclusion body
2.降低IPTG濃度甚至不加
3.菌養在低溫(16度)，shaking 慢一點
4.加些許ethanol，可以幫助誘導HSP表現幫助folding
5.fusion GST or MBP or GFP...可以有效幫助蛋白質變soluble protein
以上我都試過，5效果最好
除非不得已，不然別碰refolding
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