[求救] PCR的問題

看板Biotech作者 (as)時間18年前 (2008/01/22 18:20), 編輯推噓4(4推 0噓 13→)
留言17則, 3人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
請問PCR product跑電泳出現smear且主要產物的band很弱 該如何解決??要稀釋template嗎???還是提高anneal溫度??? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.117.91.184
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01/22 18:27, , 1F
touchdown PCR
01/22 18:27, 1F
推
01/22 20:06, , 2F
附個圖根條件大家比較好給意見吧!!
01/22 20:06, 2F
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01/23 20:04, , 3F
不好意思我還不會張貼圖正在請教別人
01/23 20:04, 3F
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01/23 20:07, , 4F
PCR反應條件：
01/23 20:07, 4F
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01/23 20:07, , 5F
94℃ 2 min
01/23 20:07, 5F
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01/23 20:12, , 6F
35cycle(94℃ 1 min, 55℃ 1 min, 72℃ 2 min)
01/23 20:12, 6F
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01/23 20:16, , 7F
72℃ 7 min
01/23 20:16, 7F
推
01/23 21:20, , 8F
你的band大小!跟膠的濃度跑的時間跟速度??資料詳細點!
01/23 21:20, 8F
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01/23 21:21, , 9F
會比較容易讓人知道你的問題可能會出在哪!!
01/23 21:21, 9F
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01/25 13:52, , 10F
01/25 13:52, 10F
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01/25 13:54, , 11F
我的PCRproduct約0.5Kb,lane 1:marker,2,4,6:sample
01/25 13:54, 11F
推
01/25 16:11, , 12F
請問一下template濃度以及抽取材料及方式(kit或是protocal)
01/25 16:11, 12F
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01/26 03:55, , 13F
我的sample是珊瑚相伴細菌抽chromosome都抽到珊瑚的DNA
01/26 03:55, 13F
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01/26 03:57, , 14F
細菌的DNA非常少不夠定量即時nest PCR,product也非常少
01/26 03:57, 14F
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01/26 04:00, , 15F
用kit抽不到DNA,是用傳統方法抽chrosomal DNA
01/26 04:00, 15F
推
01/28 16:46, , 16F
能夠增加你取的sample量嗎?如果你sample遠低於25ng/20ul的話
01/28 16:46, 16F
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01/28 16:49, , 17F
不管是進行多cycle或是多次nest好像都不能避免這種情形?
01/28 16:49, 17F
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