Re: [求救] 關於利用P. pastoris表現的問題?
※ 引述《ROKEE ( Beanazai)》之銘言：
: ※ 引述《xmanxpower (188)》之銘言：
: : 我是利用pPICZalphaC為載體以及SMD1168H為宿主
: : 我要表現蛋白酶
: : 問題一、
: : 我想問回溶到OD600=1是怎麼做的？？這一步驟
因為要換成不同碳源的 medium
從 glycerol 換成甲醇
沒洗乾淨的話對蛋白質表現的影響有多大就不得而知了
不過因為覺得每次測 OD 很麻煩
而且不停的調整濃度再取sample 測 OD 會增加汙染的可能性
所以我的做法是改成測濕重
一開始先試好大約多少比例回溶的 OD 等於 1
之後就都秤濕重然後依比例回溶
準確度頗高
而且老實說
這個地方的OD也只是一個大概
反正最終目標是取得大量表現的蛋白質
加入甲醇量對蛋白質表現量的影響還比較大
如果情況允許的話
12小時加一次的效果會比較好
或者應該說
通常 24小時加 1% 效果可能不如 12 小時加 0.5%
因為甲醇濃度太高對 pichia 本身也不太好
不過沒表現的話就是沒表現
不會因為改一大堆生長條件就變成有表現
這是浪費半年得到的結論.........
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◆ From: 122.124.87.109
推
12/02 14:16, , 1F
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