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討論串[求救] 關於利用P. pastoris表現的問題?
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Re: [求救] 關於利用P. pastoris表現的問題?
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者zyxz (嘖嘖)時間18年前 (2007/12/02 13:45), 編輯資訊
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因為要換成不同碳源的 medium. 從 glycerol 換成甲醇. 沒洗乾淨的話對蛋白質表現的影響有多大就不得而知了. 不過因為覺得每次測 OD 很麻煩. 而且不停的調整濃度再取sample 測 OD 會增加汙染的可能性. 所以我的做法是改成測濕重. 一開始先試好大約多少比例回溶的 OD 等於
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#2
Re: [求救] 關於利用P. pastoris表現的問題?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者ROKEE ( Beanazai)時間18年前 (2007/12/01 18:29), 編輯資訊
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就是M1*V1=M2V2的道理阿. 這樣的目的是洗菌. 也避免養份被耗光的medium中的雜質,去影響subculture後的新菌. 自己先試生長條件吧. 例如誘導的methanol量和總誘導時間. 甚至是medium中各成份含量. 在NCBI打一下就很多protocol可以參考. Pichia是絕
#1
[求救] 關於利用P. pastoris表現的問題?
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者xmanxpower (188)時間18年前 (2007/11/30 21:01), 編輯資訊
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我是利用pPICZalphaC為載體以及SMD1168H為宿主. 我要表現蛋白酶. 問題一、. 我看protocol上說明. 當要表現重組蛋白時. 菌要先活化到OD600=2~6. 然後離心去除上清液後. pellet要用broth回溶至OD600=1. 然後培養. 我想問回溶到OD600=1是怎麼
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