Re: [求救] 關於利用P. pastoris表現的問題?
※ 引述《xmanxpower (188)》之銘言：
: 我是利用pPICZalphaC為載體以及SMD1168H為宿主
: 我要表現蛋白酶
: 問題一、
: 我看protocol上說明
: 當要表現重組蛋白時
: 菌要先活化到OD600=2~6
: 然後離心去除上清液後
: pellet要用broth回溶至OD600=1
: 然後培養
: 我想問回溶到OD600=1是怎麼做的？？這一步驟
就是M1*V1=M2V2的道理阿
這樣的目的是洗菌
也避免養份被耗光的medium中的雜質,去影響subculture後的新菌
: 還需要注意啥事項嗎？
: 問題二、
: 在培養後
: 每24小時都要添加甲醇誘導
: 請問一下甲醇添加的量可以過量嗎？我有看過加到2％
: protocol是寫添加到final conc.為0.5%
自己先試生長條件吧
例如誘導的methanol量和總誘導時間
甚至是medium中各成份含量
在NCBI打一下就很多protocol可以參考
: 問題三、
: 在培養Pichia時
: 請問1 Liter的三角搖瓶最多裝多少broth?
: 搖瓶底部是有凹槽？還是平底的就好？
Pichia是絕對需氧菌,當然有凹槽最好
另外medium的量建議為flask容量的1/6以下
寧願小量多瓶也不要雞蛋放同個籃子裡
: 謝謝
: 可直接回信到我的ID
: 感恩
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當兵半年笨很多耶... 打字都要想半天
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