Re: [求救] transformation的問題
※ 引述《bluecsky (我要藍藍淡淡的天空)》之銘言：
: 用PCR的方式就是你要重做整個insert
: 也就是你要做his-tag+insert這整個DNA
: 不過似乎跟你原本想要的方式又多了一道手續
: 因為必須重新PCR做insert
: 這樣接好之後還是必須重新送定序
: 要是原本的gene長度比較長..有時候會容易出現一些mutation
: 假如是要用his-tag..為什麼不找方便的切位直接切下
: 接到含有his-tag的expression vector呢?
: 因為如果真的只有24 bp的話..
: 我還沒接過這麼小的XD..不知道會不會有什麼問題產生
如果怕PCR會產生mutation 其實可以試試用primer架橋的方式
圖示如下:
BamH I EcoR I
G GATCCctctgttcaac ggggacatgctctg ttcaacggggacatgG AATTC
CCTAG Ggagacaagttgcccct gtacgagacaagtt gcccctgtacCTTAA G
如上圖所示 小寫部分是欲加入的小片段
可以分成六條primer 用BamH I和EcoR I處理過vector之後
將合成的primer加入一起做ligation
記得primer 5端要先磷酸化 也不可以用CIP處理
可以試試看 加油
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◆ From: 140.123.86.42
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