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[ Biotech ]
討論串[求救] transformation的問題
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請問一下各位大大. 小弟我最近作transformation有遇到一些問題. 這實驗在重複實驗下 一只出現相同的問題. 就是我將vector(pet21b≒5 kb) + insert (≒0.6 kb)載入competent cell (DH5a). 塗plate overnight 只有一個co
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如果怕PCR會產生mutation 其實可以試試用primer架橋的方式. 圖示如下:. BamH I EcoR I. G GATCCctctgttcaac ggggacatgctctg ttcaacggggacatgG AATTC. CCTAG Ggagacaagttgcccct gtacgaga
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不好意思我不是很懂您的問題所以可能有風牛馬不相及的可能. 不過我想您的transform不成功的原因很有可能是. 1.您確定您的inserte在回收後夠濃嗎?. 在UV燈下切gel時盡量不要太久 我學長是說太久的話會不好ligation XD. 我不清楚版上各位回收這種小片段的DNA時會如何處理 不
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用PCR的方式就是你要重做整個insert. 也就是你要做his-tag+insert這整個DNA. 不過似乎跟你原本想要的方式又多了一道手續. 因為必須重新PCR做insert. 這樣接好之後還是必須重新送定序. 要是原本的gene長度比較長..有時候會容易出現一些mutation. 假如是要用h
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