Re: [求救]請問一下double digstion的問題! Orz
※ 引述《Mouseking (叫我老鼠王....-_-)》之銘言：
: ※ 引述《Nox4156 (人真好!)》之銘言：
: : 各位大家好! 我有一個Vector和Insert DNA 都要用 XbaI 和 EcoRI 處理
: : 但是NEB的Buffer推薦的是buffer 2，然後切出來後竟然會形成很多bands的情形出現!
: : 但是後來我改用 EcoRI 的專用buffer切後一樣會切出很多條bands。
: : 第一次酵素加 0.7μl 最後體積 50 μl處理3hr，
: : 第二次酵素加 0.3μl 最後體積 20 μl處理overnight。
請參考一下 酵素附的 活性 每瓶都會和你說 是幾U的酵素
要切多久 基本上和你加入的DNA 和酵素的活性有關
: : 請問條件會有差嗎? (但是結果都切的亂七八糟!)
: : 但是我之前以 EcoRI 和 XhoI 處理同樣的基因和vector切都沒問題耶~
XhoI 和 EcoRI 要用 double digestion 的確是用
EcoRI buffer
: : (用的是EcoRI 的專用buffer)
: : 謝謝各位了!
: 你可以試試sequential切...先給XbaI, heat inactivation後再加入EcoRI
: 如果還是不行....
: 建議你換一管新的再試試.....XbaI,SpeI都是很難搞的restriction enzyme
: 很多怪現象會出現尤其是作double digection....
XbaI 和 EcoRI 用buffer 2 + BSA 試試看 也可以直接用 上面的方法 也是可以的
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※ 編輯: sunorange 來自: 163.15.174.115 (10/25 18:43)
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