Re: [問題] 關於 yeast two-hybrid vector
接不進去是最後只有vector only? and insert only兩條band?
看看ligase別人用有沒有問題 ligase buffer有無加錯?
跟pneumonia大大說的一樣 可能原因很多
我以前也用過這個vector
再多注意實驗步驟中可能出錯的部份才能找到原因
※ 引述《pneumonia.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (JUAN)》之銘言：
: ※ 引述《greenmoon00.bbs@ptt.cc (蒼天之月)》之銘言：
: > 最近在接 yeast two-hybrid 用plasmid
: > 用的vector是pGBKT7 7.3kb
: > map:http://0rz.tw/9d2My
: > 接一個1.2kb的insert 切位 pst1 bamH1
: > PCR後單切 膠回收 再單切 再膠回收
: > 接的時候先45度C Denature Vector insert
: > 再跟據跑膠ban的亮度去決定比例
: > total 20 ul
: > 然後10~16度C 水浴 O/N
: > 隔日transform到 DH5a 的E.coli中表現
: > 講了這麼多....反正就是接不進去
: > 學長說可能是因為vector很長所以兩端接不太到~~
: > 有克服的方法嗎??
: 你這是cloning的技術問題
: 可能原因太多
: 回答不完
: 不過很少會碰到vector太長的問題
: 應該是其他問題
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你是巨大的海洋 我是雨下在妳身上 我失去自己的形狀 我看到遠方 愛情的模樣
曾經孤單的徬徨 曾經相信曾經失望 妳穿過重重的迷惘 那愛的慌張 終於要解放
你是誰 教我狂戀 教我勇敢地挑戰全世界 在一樣的身體裡面 一樣有愛與被愛的感覺
我愛誰 已無所謂 沒有誰能將愛情劃界限 在一樣地身體裡面 迷樣的魔力卻是更強烈
星星在夜空中閃亮 星空下我不停流浪 此生我無知的奔忙 因為你眼光 都化成了光亮
這世界全部的漂亮 不過妳可愛的模樣 妳讓我舉雙手投降 跨出了城牆 長出了翅膀
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