Re: [問題]用核蛋白做ip的問題...
1.你確定你的SAMPLE中所要IP的蛋白夠多
2.你確定你用的Ab可以做IP
3.你是用proteinA還是G
確定一抗是來自哪種動物的抗體
所選用的seprrose效率是否夠好
4.最後核蛋白做IP是OK的
你若懷疑SALT濃度太高
可以稀釋後再IP
另外應該將配方寫出
大家才能給你更好的建議
※ 引述《doskoi (doskoi)》之銘言：
: 先說說抽nuclear protein的方法
: 就是用hypotonic buffer先弄破細胞,分離出核
: 再用high salt extraction buffer去抽取核蛋白
: 但取出核蛋白後
: 不論是cytoplasma fraction 或nuclear fraction
: 想要的蛋白都沒辦法用proteinA/G抓下來
: 大部分都還留再上清液裡
: ip方法應該ok,因為其他人做不同sample做的出來
: 曾想過是不是salt concentration太高
: 但連cytoplasma fraction都沒有做出來
: 想說是不是有什麼其他問題?
: 有人用nuclear protein做ip嗎?
: 可以分享一下經驗嗎?
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