Re: [問題] RFLP~
※ 引述《kaifish (喔.....................)》之銘言：
: ※ 引述《mona210 (喔屋)》之銘言：
: : PCR 所得到的 DNA 片段中一個EcoRI的切割位置，而某噬菌體中有五個EcoRI切割位置，
: : 那我應該加入多少體積酵素才能在一小時內把1μg實驗用的DNA給完全切割?
: : ( EcoRI酵素濃度約為10 U/μl )
: : 我想要知道怎麼算....
: : 因為自從上次那個"初學者問題"
: : 有時對自己會有點沒信心 ^^"
: : 希望板上的老手or高手能幫幫忙
: : 謝謝^^~
: 你的酵素是跟NEB買的嗎?
: 根據NEB的酵素unit的定義是
: 1 U = digest 1ug DNA in an hour
: 所以基本上如果你想在一小時內將你的實驗DNA完全切割
: 取 1 U 應該夠(換句話說就是 0.1 uL)
其實如果不放心的話，酵素可以多放一些啦！
但 EcoRI 會有 star activity
使用時需注意 glycerol 濃度小於 5% (加入之酵素量小於總體積的十分之一)
pH<8.0 (使用酵素附的 buffer 就是了)
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