Re: [問題] RFLP~
※ 引述《kaifish.bbs@ptt.cc (喔.....................)》之銘言：
> ※ 引述《mona210 (喔屋)》之銘言：
> : PCR 所得到的 DNA 片段中一個EcoRI的切割位置，而某噬菌體中有五個EcoRI切割位置，
> : 那我應該加入多少體積酵素才能在一小時內把1μg實驗用的DNA給完全切割?
> : ( EcoRI酵素濃度約為10 U/μl )
> : 我想要知道怎麼算....
> : 因為自從上次那個"初學者問題"
> : 有時對自己會有點沒信心 ^^"
> : 希望板上的老手or高手能幫幫忙
> : 謝謝^^~
> 你的酵素是跟NEB買的嗎?
> 根據NEB的酵素unit的定義是
> 1 U = digest 1ug DNA in an hour
> 所以基本上如果你想在一小時內將你的實驗DNA完全切割
> 取 1 U 應該夠(換句話說就是 0.1 uL)
不完全如此
unit的定義 每種酵素及廠牌不同
主要看這酵素切的DNA上面有多少切位以及該DNA的大小
你可以去翻目錄
1 u = complete digestion of 1 microgram Lambda phage DNA ( 40 kb, 6 cutting sites)
1 u = complete digestion of 1 microgram pUC18 phage DNA (2.7 kb, 2 cutting sites)
這兩者差距甚大
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※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
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