Re: [問題] PCR夾GC rich region
※ 引述《dropdred (keep the faith)》之銘言：
: 最近在夾GC rich的位置,約80%
: amplicon約650bp
: primer是用primer3設計的,Tm=60度
: 試過AmpliTaq, 在60度跟touchdown會夾出約300bp的片段
: 但在升溫上去68度就什麼都沒有了...連殘存的primer都看不見
: 另外,還試了AmpliTaq Gold
: 更慘,不論是60, 65, 68度
: 什麼都沒有...整塊膠只有marker
: 想請問大家的經驗....感激不盡!!
來跟大家報告一下進度
老闆拿了一組叫做FailSafe Premix Selection Kit
好像是波斯特在賣的吧
裡頭有12種premix
據說明書上寫...就是MgCl2跟Betaine濃度上的差異
然後...我用60度去跑
12種都試
有...就是那個band...
再其中一種premix 有夾出我要的大小
不過量很少
看來AmpliTaq Gol被擊敗了
hotstart enzyme似乎沒辦法征服GC rich
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◆ From: 61.228.207.175
推
04/21 00:09, , 1F
04/21 00:09, 1F
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