[問題] PCR夾GC rich region
最近在夾GC rich的位置,約80%
amplicon約650bp
primer是用primer3設計的,Tm=60度
試過AmpliTaq, 在60度跟touchdown會夾出約300bp的片段
但在升溫上去68度就什麼都沒有了...連殘存的primer都看不見
另外,還試了AmpliTaq Gold
更慘,不論是60, 65, 68度
什麼都沒有...整塊膠只有marker
想請問大家的經驗....感激不盡!!
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