[問題] PCR夾GC rich region

看板Biotech作者 (keep the faith)時間19年前 (2007/04/17 18:29), 編輯推噓6(601)
留言7則, 5人參與, 最新討論串1/3 (看更多)
最近在夾GC rich的位置,約80% amplicon約650bp primer是用primer3設計的,Tm=60度 試過AmpliTaq, 在60度跟touchdown會夾出約300bp的片段 但在升溫上去68度就什麼都沒有了...連殘存的primer都看不見 另外,還試了AmpliTaq Gold 更慘,不論是60, 65, 68度 什麼都沒有...整塊膠只有marker 想請問大家的經驗....感激不盡!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.228.195.21

04/17 18:51, , 1F
加betaine 1M,我加了就P出來了!!親身經歷
04/17 18:51, 1F

04/17 18:52, , 2F
加 1% DMSO 也 p出來過~~P 2.5 K 的!!
04/17 18:52, 2F

04/17 19:43, , 3F
請問上述所說的是最終濃度嗎
04/17 19:43, 3F

04/17 20:44, , 4F
是..
04/17 20:44, 4F

04/17 21:24, , 5F
可以考慮把denaturing T的時間加長這樣也會有幫助
04/17 21:24, 5F

04/18 23:37, , 6F
不考慮作Nested PCR嗎 ^^
04/18 23:37, 6F

04/20 13:04, , 7F
是~~
04/20 13:04, 7F
文章代碼(AID): #169A6Ls9 (Biotech)
文章代碼(AID): #169A6Ls9 (Biotech)