Re: [問題] EMSA做不出supershift
※ 引述《lysa (上台北了)》之銘言：
: ※ 引述《aggaci (reject！又reject！)》之銘言：
: : 先確定你的AB可以作EMSA
: : ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
: 我買的Ab是sc-186x,所以應該是可以做EMSA的
你如何知道呢？satacruz的datasheet不準，他每隻都說可以
: positive control
: : 用CREB鐵定會binding的probe作EMSA，再測試Ab能否supershift成功
: ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
: 這我不太懂,要怎麼確定這probe是creb一定可以binding的?不是要用Ab check嗎?
如PAPER已經發表的確定此段DNA CREB一定可以binding
或是你用的competitor 你不是說你有CREB的oligonucleotide嗎？
positive control？懂嗎？
舉個例子
若此CREB probe(當positive control)可以supershift成功
但你的probe不行 納表示你的probe可能不是CREB結合在上面
請節哀
若兩組都不行，那表示你supershift條件沒抓到，或抗體有問題
通常supershift我習慣買兩支不一樣的抗體來作
以避免某些protein不是抓不到而是被擋到了
: : 看PAPER用這隻抗體都是用什麼條件？
: : 先加抗體？後加抗體？跟probe一起加？放冰上嗎？
: paper看過了...所有的情況都有試過.....包括前加後加抗體,室溫下或冰上等
: 我想再請問板上的EMSA達人,在binding的過程中
: 有沒有先加cold probe會有差別嗎?
: 我都是cold probe跟hot probe同時加的...
: 還有請問有專門寫EMSA的專書嗎???
: 因為我不是讀分生本科系出來的
: 很多都很不懂。。。麻煩請大家解答囉！！謝謝！！
先加的倍數會比較低10x-50x
一起加的倍數較高 100x-1000x都有
一樣，競爭的實驗negative & positive control都要有！
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◆ From: 140.114.100.165
※ 編輯: aggaci 來自: 140.114.100.165 (04/17 22:42)
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