Re: [問題] EMSA做不出supershift
※ 引述《aggaci (reject！又reject！)》之銘言：
: ※ 引述《lysa (上台北了)》之銘言：
: : 請問EMSA做不出supershift會是什麼問題ㄋ??
: : antibody已經用IP證明可以跟protein binding
: : 改變cold probe濃度以及mutant probe都可以看到band的改變
: : 不曉得問題出在哪邊???
: 先確定你的AB可以作EMSA
: ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
我買的Ab是sc-186x,所以應該是可以做EMSA的
positive control
: 用CREB鐵定會binding的probe作EMSA，再測試Ab能否supershift成功
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
這我不太懂,要怎麼確定這probe是creb一定可以binding的?不是要用Ab check嗎?
: 看PAPER用這隻抗體都是用什麼條件？
: 先加抗體？後加抗體？跟probe一起加？放冰上嗎？
paper看過了...所有的情況都有試過.....包括前加後加抗體,室溫下或冰上等
我想再請問板上的EMSA達人,在binding的過程中
有沒有先加cold probe會有差別嗎?
我都是cold probe跟hot probe同時加的...
還有請問有專門寫EMSA的專書嗎???
因為我不是讀分生本科系出來的
很多都很不懂。。。麻煩請大家解答囉！！謝謝！！
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