Re: [求救] 關於Cy5的發光機制
※ 引述《amnesiachick (;l;l)》之銘言：
: 有幾個跟Cy5有關的問題 希望知道的人能夠給點指點^^
: Red laser light that produces fluorescent emission from Cy5 can also
: switch the dye to a stable dark state. Exposure to green laser light
: converts Cy5 back to the fluorescent state, but the recovery rate
: depends critically on the close proximity of a secondary dye, Cy3.
: 主要是有關這一段的問題.在看到這篇paper以前我認知中的Cy5是照紅光就會亮,
: 然後就一直亮到它photobleach為止.所以我看不懂為什麼red laser會
: "switch the dye to a stable dark state".而且這裡green laser的存在目的是什麼呢?
: 如果不照green laser, 一直照red laser, Cy5就不會再亮了嗎?
: "green laser light converts Cy5 back to the fluorescent state",
: fluorescent state不是指excited state嗎?可是在paper裡面照綠光的
: 時候是沒有emission的. 這幾部分我真的很疑惑.
: 另外請問Cy3跟Cy5之間的距離會影響recovery state的問題,這應該從哪個角度去解釋呢?
: 因為我查相關資料,裡面也只是提到這個現象,但並沒有詳細解釋為什麼?
: 拜託大家了^^
這篇的意思似乎是將cy3和cy5結合在一起
先用紅光quench掉cy5 (dark state)
再用綠光激發cy3 讓cy3經由FRET去激發cy5
這個過程是隨機的(stochastic)
因為大部分的cy5已經被quench
而cy3誘發的cy5又是隨機的 所激發的cy5很少
因此可以達到single molecular imaging
ps.(quench 跟 irreversible bleach定義上應該不一樣)
ps2. 這概念感覺有點像 stimulated emission depletion (STED) microscopy
ps3.很貴
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