Re: [求救] 關於Cy5的發光機制
※ 引述《amnesiachick (;l;l)》之銘言：
: 有幾個跟Cy5有關的問題 希望知道的人能夠給點指點^^
: Red laser light that produces fluorescent emission from Cy5 can also
: switch the dye to a stable dark state. Exposure to green laser light
: converts Cy5 back to the fluorescent state, but the recovery rate
: depends critically on the close proximity of a secondary dye, Cy3.
: 主要是有關這一段的問題.在看到這篇paper以前我認知中的Cy5是照紅光就會亮,
: 然後就一直亮到它photobleach為止.所以我看不懂為什麼red laser會
: "switch the dye to a stable dark state".而且這裡green laser的存在目的是什麼呢?
: 如果不照green laser, 一直照red laser, Cy5就不會再亮了嗎?
: "green laser light converts Cy5 back to the fluorescent state",
: fluorescent state不是指excited state嗎?可是在paper裡面照綠光的
: 時候是沒有emission的. 這幾部分我真的很疑惑.
: 另外請問Cy3跟Cy5之間的距離會影響recovery state的問題,這應該從哪個角度去解釋呢?
: 因為我查相關資料,裡面也只是提到這個現象,但並沒有詳細解釋為什麼?
: 拜託大家了^^
我想實驗應該是利用FRET原理
Cy3的emission wavelength 有某部分與Cy5的 excitation wavelength 重疊
當以550 nm激發Cy3，只要Cy5分子靠的夠近，Cy3 emission出來的能量emission
wavelength就會成為Cy5的excitation wavelength(因為有重疊到)因而使Cy5釋放出
螢光出來。A螢光分子的emission波長恰好落於B螢光分子的excitation波長導致A螢光
quench, B分子發光
簡單說
若cy3, cy5 兩分子靠的夠近，激發cy3分子發光，看不到cy3發出的螢光，反而看到cy5
的螢光產生
若cy3, cy5 兩分子靠的不夠近，激發cy3分子發光，就只能看見cy3分子發螢光囉
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織田信長：「杜鵑不叫，我殺了牠！」
豐臣秀吉：「杜鵑不叫，我想辦法讓牠叫！」
德川家康：「杜鵑不叫，我等牠叫！」
Angus Tzeng：「杜鵑不叫，我自己叫！XD」
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◆ From: 125.231.2.62
推
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