Re: [求救] 抽pasmid的量都好少
※ 引述《puec ()》之銘言:
: 請問你是transform什麼樣子的plasmid進去E.coli。有時候E.coli遇到不喜歡的
: plasmid產量就會很少,就算是你增加體積,抽出來足夠的plasmid以後,用enzyme
: 切過就會出現smear!!我猜你的plasmid可能很大,所以一看到smear你就以為是genomic
: DNA 污染。smear產生的原因是因為kit抽出來的dna不夠純,帶了一些dnase。為什麼?
: 因為E.coli不喜歡嘛。
: 建議你可以去別人家借借看其他牌子的kit抽抽看,我猜結果應該是一樣。在我手上
我不這麼覺得...
我們lab用這組maxi kit通通都說很難用
換invitrogen的kit,結果量都超高....maxi可以抽到2mg(1ug/1ul)的plasmid
換clonetech的Maxi,結果也一樣
不過這組quality差一點,260/280 Ration 1.7左右
我個人真的覺的是這組kit的問題
前面不也有人說過有雷同的情形嗎
或是有誰用這組kit抽成功過的
所以換組kit吧 或是跟promega反應
: 的plasmid都是超不穩定的,就算是用qiagen抽,一切,還是會有smear。但是我發
: 現MN (前clontech)的nucleobond抽出來的plasmid相當乾淨,並不會有上述問題。
: 如果你的plasmid真的很大的話,記得用高溫(60度左右)的熱水去elute,可以提高
: 產量。
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