Re: [求救] 抽pasmid的量都好少

看板Biotech作者時間17年前 (2006/12/18 17:27), 編輯推噓2(202)
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請問你是transform什麼樣子的plasmid進去E.coli。有時候E.coli遇到不喜歡的 plasmid產量就會很少,就算是你增加體積,抽出來足夠的plasmid以後,用enzyme 切過就會出現smear!!我猜你的plasmid可能很大,所以一看到smear你就以為是genomic DNA 污染。smear產生的原因是因為kit抽出來的dna不夠純,帶了一些dnase。為什麼? 因為E.coli不喜歡嘛。 建議你可以去別人家借借看其他牌子的kit抽抽看,我猜結果應該是一樣。在我手上 的plasmid都是超不穩定的,就算是用qiagen抽,一切,還是會有smear。但是我發 現MN (前clontech)的nucleobond抽出來的plasmid相當乾淨,並不會有上述問題。 如果你的plasmid真的很大的話,記得用高溫(60度左右)的熱水去elute,可以提高 產量。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.130.218.41

12/18 21:40, , 1F
我用過pUC19 pGEX pET pEGFP pGKBT7 pGAD 全都一樣結果
12/18 21:40, 1F

12/18 21:41, , 2F
最近有genoomic DNA是pET pGEX pEGFP 應該不是質體的錯
12/18 21:41, 2F

12/18 21:42, , 3F
而且是>10kb有跑不下來的band 不是smear
12/18 21:42, 3F

12/20 12:42, , 4F
這就真的是奇了~換kit吧~
12/20 12:42, 4F
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