Re: [問題]有關cloning 選用的tag

看板Biotech作者shunze (畢典End=延畢Start)時間18年前 (2006/05/14 17:06)推噓6(6推 0噓 0→)

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混搭Taq和pfu(或是其他具有proof reading的Taq) PCR cycle<30 這樣做出來的PCR產就兼具正確及A的尾端跑個電泳確認產物大小及濃度若有雜BAND就回收預計片段並濃縮接在專門接PCR產物的載體即可(ex pGEM-T, pCRII-TOPO) 我比較偏好後者因為時間只需5分鐘左右室溫下即可完成 ※ 引述《winjj (小深藍)》之銘言： : 是Taq 不是Tag : taq類都沒有proof reading 的功能 : 有proof reading功能的是pfu : 但是pfu沒有會在PCR產物末端加上A的特性 : A要自己另外加上去 : 通常用taq類的話, 就是接上去後在定序確認啦 : ※ 引述《showx2.bbs@bbs.sa.ncyu.edu.tw (MIMIMOMO毛毛和我)》之銘言： : : 我是大學部菜鳥 : : 因為前一陣子用plantium tag、Extag做PCR得到我的產物 : : 與p-blue、PGEMT ligation : : 但是藍白篩的結果白色菌落都沒有得到insert : : 總共重複做了數十次依樣沒有結果 : : 現在boss叫我用violet試試看(我的vector是PGEMT easy vector) : : 但是violet不是沒有proof reading的功能嗎 : : 這樣該如何做轉殖 : : 我有查過相關資訊，應該是如果insert有接近去後 : : 得到定序結果 : : 只有功能性的序列沒有問題就可以轉殖 : : 但是要如何確定他哪些是功能性的序列 : : 請教各位老手了~~ : : 感恩喔 -- 天是藍的宇宙也是藍的在這廣大的天地中誰能捍衛自己的明天看著旭日東昇 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.136.25.176

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oplz

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shunze

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bystander945

05/16 06:08, , 3^F

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