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討論串[問題]有關cloning 選用的tag
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#1
[問題]有關cloning 選用的tag
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者showx2.時間18年前 (2006/05/14 01:38), 編輯資訊
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我是大學部菜鳥. 因為前一陣子用plantium tag、Extag做PCR得到我的產物. 與p-blue、PGEMT ligation. 但是藍白篩的結果白色菌落都沒有得到insert. 總共重複做了數十次依樣沒有結果. 現在boss叫我用violet試試看(我的vector是PGEMT easy
(還有99個字)
#2
Re: [問題]有關cloning 選用的tag
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者winjj (小深藍)時間18年前 (2006/05/14 11:15), 編輯資訊
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是Taq 不是Tag. taq類都沒有proof reading 的功能. 有proof reading功能的是pfu. 但是pfu沒有會在PCR產物末端加上A的特性. A要自己另外加上去. 通常用taq類的話, 就是接上去後在定序確認啦. ※ 引述《showx2.bbs@bbs.sa.ncyu.e
#3
Re: [問題]有關cloning 選用的tag
推噓6(6推 0噓 0→)留言6則，0人參與, 最新作者shunze (畢典End=延畢Start)時間18年前 (2006/05/14 17:06), 編輯資訊
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混搭Taq和pfu(或是其他具有proof reading的Taq). PCR cycle<30. 這樣做出來的PCR產就兼具正確及A的尾端. 跑個電泳 確認產物大小及濃度. 若有雜BAND就 回收預計片段 並濃縮. 接在專門接PCR產物的載體即可(ex pGEM-T, pCRII-TOPO). 我
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