Re: [問題] 關於細胞內自由態鈣離子測定之實驗問題
加入螢光探測劑 Fluo-3 AM 之後需要等待一段時間，其原因首先是要讓 Fluo-3 AM 穿透細胞膜，其次如你所說，要等待細胞內酵素將 Fluo-3 AM 轉變為非通透性之 Fluo-3。
再來，我想你誤解了整個實驗的原理。
一、你測的是 Fluo-3 在波長 530 nm 的發光值 (emission light intensity) 而非吸光值。該發光值與鈣離子濃度成正相關，因此可以作為細胞內鈣離子的指標。
二、另兩管之目的是在做校正，以便求出正確的鈣離子濃度。
Fmax 那管加入 ionomycin 及 CaCl2，讓細胞膜通透大量鈣離子，所以此時測到的發光值係最大值 (maximum)，代表大量鈣進入細胞時，Fluo-3 螢光的飽和值。
相反地，Fmin 那管加入 ionomycin 及 EDTA，讓細胞內鈣離子流失被螯合劑 EDTA 清除掉，所以此時測到的發光值係最小值 (minimum)，代表無鈣存在時， Fluo-3 螢光的背景值。
從以上定義就知道，你們測得的數據沒有問題。接著再利用 Fmax, Fmin 兩個校正點，將 F 值代入公式（請見廠商說明）可以內插算出待測樣品細胞之鈣離子濃度。
最後再請問你，你是用何種機器做這個實驗？
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推
05/21 20:14, , 1F
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